Llavero Neuronas hipocampales 3

Distribución de neuronas hipocampales que expresan EGFP del promotor Nr4a1/Nur77 (Tg(Nr4a1-EGFP)GY139Gsat, www.gensat.org) en el camping hippoal CA1 coloreado para el transportador de glutamato vesicular (VGluT1, rojo, políclonal Invitrogen, 1:1000 00) y manchado con DAPI (azul) para mostrar las capas de las celdas. La expresión de EGFP se amplificó con pollo anti-GFP (Abcam, 1:2000). VGluT1 etiqueta terminales excitatorios que se sintetizan en la capa molecular de la circunvolución dentada, terminales de fibra de mossy en CA3 y campos dendriticos de las células piramidales en el radio de estrato y estrato. Nr4a1-EGFP se expresa fuertemente por las células piramidales CA1 y en menor medida en las células piramidales CA3 con células escasas en la circunvolución dentada (ver imágenes asociadas). La sección (40 um, sagittal) se montó con Fluoromount G e imaginó con un objetivo 5X, 0,15 NA en un microscopio Zeiss Axiovert. El AF568 se excitó a 562/40 nm y se recogió la emisión a 624/40 nm con filtros Semrock y un dicroico de banda única (530-585 nm reflejados, 601-800 nm transmitidos). El AF488 se excitó a 482/35 nm y las emisiones recogidas a 536/40 nm con filtros Semrock y una única banda dicróica (446-499 nm reflejados, 513-735 nm transmitidos). DAPI se emocionó a 350/50 nm y la emisión recolectada a 460/50 nm con una dicrómina CLP400 (Chroma). Se capturaron imágenes individuales para cada canal utilizando un CCD de Axiocam MR de Zeiss y pseudo-coloreado utilizando Axiovisión. En la imagen presentada se utilizó la sustracción de fondo lineal. Consulte Davis and Puhl (2011), Pubmed ID 21305052, para obtener un protocolo de tinción detallado e imágenes de la expresión de EGFP en el estriado y amígdala en esta cepa. Esta imagen es parte de una serie que caracteriza la expresión de EGFP del promotor Nr4a1 en todo el cerebro.